Computational prediction and characterisation of miRNAs and their pathway genes in human schistosomiasis caused by Schistosoma haematobium

BACKGROUND Key genes control the infectivity of the Schistosoma haematobium causing schistosomiasis. A method for understanding the regulation of these genes might help in developing new disease strategies to control schistosomiasis, such as the silencing mediated by microRNAs (miRNAs). The miRNAs have been studied in schistosome species and they play important roles in the post-transcriptional regulation of genes, and in parasite-host interactions. However, genome-wide identification and characterisation of novel miRNAs and their pathway genes and their gene expression have not been explored deeply in the genome and transcriptome of S. haematobium. OBJECTIVES Identify and characterise mature and precursor miRNAs and their pathway genes in the S. haematobium genome. METHODS Computational prediction and characterisation of miRNAs and genes involved in miRNA pathway from S. haematobium genome on SchistoDB. Conserved domain analysis was performed using PFAM and CDD databases. A robust algorithm was applied to identify mature miRNAs and their precursors. The characterisation of the precursor miRNAs was performed using RNAfold, RNAalifold and Perl scripts. FINDINGS We identified and characterised 14 putative proteins involved in miRNA pathway including ARGONAUTE and DICER in S. haematobium. Besides that, 149 mature miRNAs and 131 precursor miRNAs were identified in the genome including novel miRNAs. MAIN CONCLUSIONS miRNA pathway occurs in the S. haematobium, including endogenous miRNAs and miRNA pathway components, suggesting a role of this type of non-coding RNAs in gene regulation in the parasite. The results found in this work will open up a new avenue for studying miRNAs in the S. haematobium biology in helping to understand the mechanism of gene silencing in the human parasite Schistosome.

Participação da via do Hedgehog na fibrose hepática da esquistossomose mansoni humana e murina experimental / Participation via the Hedgehog in liver fibrosis of human schistosomiasis and experimental murine

INTRODUÇÃO/OBJETIVO: A esquistossomose mansonica é causa importante de fibrose hepática e hipertensão porta em regiões tropicais, e a patogênese da fibrose não está bem esclarecida. Como a via do hedgehog e um dos seus genes alvos, a osteopontina, estão envolvidos em fibroses hepáticas de outras etiologias o objetivo foi investigar a ativação destas vias na esquIsitossomose humana e murina experimental, no intuito de verificar o seu envolvimento no desenvolvimento da forma hepatoesplênica da esquistossomose mansonica (FHE). MATERIAL E MÉTODOS: 87 biópsias em cunha de fígados de pacientes com FHE submetidos a cirurgia e fragmentos de fígado de camundongos suiços infectados com Schistosoma mansoni foram submetidos a métodos imunohistoquímicos e de biologia molecular para avaliar a expressão de ligantes hedgehog (Ihh, Shh), receptor Patched, fatores de transcrição Gli 1 e 2...

inglês: BACKGROUND AND AIMS: Schistosomiasis is a major cause of liver fibrosis and portal hypertension in tropical regions, and the pathogenesis of fibrosis is not well established. As hedgehog pathway and one of its target genes, osteopontin, are involved in liver fibrosis of other etiologies our aims were to investigate the activation of these pathways in human and experimental murine schistosomiasis, in an attempt to verify their involvement in the development of hepatosplenic schistosomiasis mansoni (HS). METHODS: 87 wedge liver biopsies of patients with HS submitted to surgery and liver fragments Swiss mice infected with Schistosoma mansoni were submitted to immunohistochemistry and molecular biology methods to evaluate the expression of hedgehog ligands (Ihh, Shh), patched receptor , Gli transcription factors and osteopontin...

Participação da via do Hedgehog na fibrose hepática da esquistossomose mansoni humana e murina experimental / Participation via the Hedgehog in liver fibrosis of human schistosomiasis and experimental murine

INTRODUÇÃO/OBJETIVO: A esquistossomose mansonica é causa importante de fibrose hepática e hipertensão porta em regiões tropicais, e a patogênese da fibrose não está bem esclarecida. Como a via do hedgehog e um dos seus genes alvos,a osteopontina, estão envolvidos em fibroses hepáticas de outras etiologias o objetivo foi investigar a ativação destas vias na esquIsitossomose humana e murina experimental, no intuito de verificar o seu envolvimento no desenvolvimento da forma hepatoesplênica da esquistossomose mansonica (FHE). MATERIAL E MÉTODOS: 87 biópsias em cunha de fígados de pacientes com FHE submetidos a cirurgia e fragmentos de fígado de camundongos suiços infectados com Schistosoma mansoni foram submetidos a métodos imunohistoquímicos e de biologia molecular para avaliar a expressão de ligantes hedgehog (Ihh, Shh), receptor Patched, fatores de transcrição Gli 1 e 2 e osteopontina. Osteopontina sérica e ligante Shh do hedgehog foram avaliados em camundongos suíços infectados e os de osteopontina em camundongos CBA/J infectados e em pacientes com FHE e forma hepatointestinal da esquistossomose. In vitro foi avaliado o efeito de antígeno solúvel do ovo (SEA) em células de Kuppfer, células estreladas, macrófagos, colangiócitos e células endoteliais sinusoidais hepáticas. A relação com a via da IL-13 foi avaliada em camundongos geneticamente deficientes ou hiperexpressando a citocina. Foi avaliado in vitro se a IL-13 induz ligantes hedghog ou ativação da via em células de Kuppfer. RESULTADOS: Os resultados mostraram: (a) aumento expressão de ligantes Ihh, de fatores de transcrição Gli2 e de osteopontina no fígado de camundongos suíços infectados com Schistosoma mansoni, aumento de shh e osteopontina no plasma de camundongos suíços e de osteopontina no plasma de camundongos CBA/J infectados com S. mansoni; (b) aumento na expressão de Ihh, Shh, Gli1 e 2, receptor Patched e de osteopontina no fígado de pacientes com esquistossomose e aumento da osteopontina sérica em pacientes com a FHE; (c) A expressão de ligantes hedgehog e de Gli2 foi observada em macrófagos, células estreladas, ductos biliares e células endoteliais, e a de osteoponina em ductos biliares,macrófagos e células estreladas/miofibroblastos; (d) correlação positiva entre ativação do hedgehog (Gli2 e osteopontina) e fibrose, no modelo murino experimental e nos pacientes; nestes a correlação também foi observada com o grau de fibrose classificada pelo ultrassom e com a hipertensão porta; (e) Inibição in vitro do hedgehog com ciclopamina e vismodegib ou por nocauteamento condicional de receptor Smoothened bloqueou a ativação alternativa de macrófagos e inibiu a angiogênese a partir de células endoteliais sinusoidais hepáticas; (f) que o bloqueio da via da IL-13 reduziu e a hiperexpressão aumentou a ativação da via do hedgehog e IL-13 diretamente induziu, in vitro,produção de ihh em células de Kupffer de camundongos e de humanos, demonstrando a inter-relação das duas vias...

BACKGROUND AND AIMS: Schistosomiasis is a major cause of liver fibrosis and portal hypertension in tropical regions, and the pathogenesis of fibrosis is not well established. As hedgehog pathway and one of its target genes, osteopontin, are involved in liver fibrosis of other etiologies our aims were to investigate the activation of these pathways in human and experimental murine schistosomiasis, in an attempt to verify their involvement in the development of hepatosplenic schistosomiasis mansoni (HS). METHODS: 87 wedge liver biopsies of patients with HS submitted to surgery and liver fragments Swiss mice infected with Schistosoma mansoni were submitted to immunohistochemistry and molecular biology methods to evaluate the expression of hedgehog ligands (Ihh, Shh), patched receptor , Gli transcription factors and osteopontin. Serum osteopontin and Shh were evaluated in infected Swiss mice and osteopontin was evaluated in serum of infected CBA/J mice and plasma from patients with hepatointestinal and HS forms of schistosomiasis. The effect of soluble egg antigen (SEA) on Kuppfer cells, stellate cells, macrophages, cholangiocytes and liver sinusoidal endothelial cells was evaluated in vitro. Relationship with IL-13 pathway was evaluated in mice genetically deficient or with hyperexpression of this cytokine. Whether IL-13 induces production of ligands and/or activation of the hedgehog pathway in Kuppfer cells was evaluated in vitro. RESULTS: Results demonstrated: (a) increased expression of Ihh, transcription factor Gli2 and osteopontin in the livers of Swiss mice infected with S. mansoni, increased plasma levels of shh and osteopontin in infected Swiss mice and increased osteopontin in plasma of S. mansoni infected CBA/J mice; (b) increased expression of ihh, shh, Gli1 and 2, patched and osteopontin receptor in the liver of patients with schistosomiasis and increased serum osteopontin in patients with HS; (c) expression of hedgehog ligands and Gli2 was observed in macrophages, stellate cells, endothelial cells and bile duct and expression of osteopontin was detected in macrophages and stellate/myofibroblast cells; (d) positive correlation between activation of the hedgehog (Gli2 and osteopontin) and fibrosis in experimental murine model and in patients; these correlation was also observed with the degree of fibrosis classified by ultrasound and with portal hypertension; (e) in vitro inhibition of hedgehog pathway with cyclopamine or vismogedib or by conditional knockout of Smoothened co-receptor blocked the alternative activation of macrophage and inhibited angiogenesis in liver sinusoidal endothelial cells; (f) reduction of IL-13 pathway or IL-13 over-expression respectively reduced or increased the activation of the hedgehog pathway and IL-13 directly induced in vitro ihh production in Kupffer cells from mice and human, demonstrating a cross-talk between the two pathways...

Avaliação do papel das células estreladas hepáticas, células endoteliais sinusoidais e macrófagos tipo II, no remodelamento pós-quimioterápico das lesões hepáticas na esquistossomose mansônica experimental / Assessing the role of hepatic stellate cells, sinusoidal endothelial cells and macrophages type II, post-chemotherapy remodeling of liver lesions in experimental schistosomiasis

Na esquistossomose mansônica o fígado é o órgão alvo das agressões patogênicas, onde as lesões hepáticas caracterizam-se principalmente pela presença de granulomas periovulares e formação de fibrose periportal, além de alterações vasculares responsáveis pela hipertensão dentro do sistema venoso portal. A angiogênese precede a maioria dos casos de fibrose, onde se verifica participação direta das células estreladas hepáticas (CEH) e das células endoteliais sinusoidais (CES) que são estimuladas, principalmente por macrófagos do tipo II (M2) – ativados alternativamente. O tratamento para esquistossomose é feito pelo uso do praziquantel (PZQ)...

The liver is a target for pathogenic attacks during schistosomiasis, showing periovular granulomas and the formation of periportal fibrosis, besides vascular changes responsible for hypertension within portal venous system. Angiogenesis precedes most cases of fibrosis, which can be verified the presence of hepatic stellate cells (HSC) and liver sinusoidal endothelial cells (LSEC) stimulated mostly by macrophages type II (M2) – alternatively activated. Schistosomiasis treatment is based on praziquantel (PZQ)...

Glomerulopatia esquistossomótica: comportamentos das alterações em camundongos infectados pelo schistosoma mansoni, antes e depois do tratamento com praziquantel / Schistosomal glomerulopathy: behavior changes in mice infected with schistosoma mansoni before and after treatment with praziquantel

A esquistossomose é um grave problema de saúde pública causado pelo helminto Schistosoma mansoni, sendo uma das endemias parasitárias de maior prevalência no Brasil. Apresenta diversas formas clínicas passíveis de serem reproduzidas em modelos experimentais. A lesão renal da glomerulopatia esquistossomótica está associada ao antígeno parasitário que, em consequência da presença de hipertensão portal e formação da circulação colateral, permitem que complexos imunes sejam depositados em glomérulos renais, desencadeando um processo inflamatório progressivo. O objetivo do trabalho foi avaliar o comportamento das alterações renais em camundongos infectados pelo S. mansoni, antes e após o tratamento com praziquantel, a fim de observar a resposta à presença dos complexos imunes e ao processo inflamatório formado na glomerulopatia. Foram organizados 3 grupos de camundongos BALB/c de ambos os sexos: grupo controle intacto (10 animais), grupo de reinfectados tratados (35 animais) e grupo de reinfectados não tratados (35 animais). A avaliação da estrutura renal foi analisada através da microscopia óptica, observando a histologia glomerular com as colorações de HE, PAS e PIFG, através da imunofluorescência marcando IgG e antígeno de Nash, e da microscopia eletrônica de transmissão com emprego da morfometria para avaliar áreas de depósito de complexos imunes. Foram analisadas, também, a carga parasitária, o peso do fígado, a presença dos vermes nas veias mesentéricas e a estrutura física dos órgãos. Os resultados demonstraram significativa redução da carga parasitária, do peso do fígado, das alterações estruturais nas observações histológicas e dos depósitos de complexos imunes em área e marcação no tecido renal, após tratamento com praziquantel. O tratamento específico reverteu os processos iniciais de agressão renal na glomerulopatia do modelo experimental, embora em alguns poucos camundongos, após a quimioterapia, a doença se manteve. Os achados deste trabalho reforçam a possibilidade de que o estado normal de estrutura renal pode ser restabelecido com o tratamento antiparasitário, desde que ministrado logo que se instala a glomerulopatia esquistossomótica clínica.

Schistosomiasis is an important public health problem due to infection with the helminth Schistosoma mansoni, which is also one the parasitic diseases listed as highly prevalent in Brazil. It presents several clinical forms, which are susceptible of experimental reproduction in mice. The lesion involving the kidney – Schistosomal glomerulopathy – is related to the presence of circulating parasite antigens, which can be attached to circulating antibodies to form antigen-antibody complexes with glomerular deposition. However, in the presence of portal hypertension and collateral circulation, these antigen complexes, can bypass macrophage clearance and reach the systemic circulation, thus coming to be deposited within the renal glomeruli, starting a progressive inflammatory process. The aim of this research was to evaluate renal changes in mice infected with S. mansoni, before and after treatment with praziquantel, through the presence of immune complexes in the glomeruli, and its correlation with the glomerular changes shown. BALB/c mice infected, infected and treated mice and non-infected groups were evaluated. Besides the evaluation of the renal changes by optical microscopy (HE, PAS, PIFG), immunofluorescence (IgG and Nash antigen) and transmission electron microscopy, a morphometric study of the areas containing immune complexes was also attempted. Besides parasite burden, liver weigh, number of worm pairs within mesenteric veins, and organs physical structure, were also evaluated.

Schistosome serine protease inhibitors: parasite defense or homeostasis?

Serpins are a structurally conserved family of macromolecular inhibitors found in numerous biological systems. The completion and annotation of the genomes of Schistosoma mansoni and Schistosoma japonicum has enabled the identification by phylogenetic analysis of two major serpin clades. S. mansoni shows a greater multiplicity of serpin genes, perhaps reflecting adaptation to infection of a human host. Putative targets of schistosome serpins can be predicted from the sequence of the reactive center loop (RCL). Schistosome serpins may play important roles in both post-translational regulation of schistosome-derived proteases, as well as parasite defense mechanisms against the action of host proteases.

Serpinas são uma família de inibidores macromoleculares estruturalmente conservados encontrados em inúmeros sistemas biológicos. O término e a anotação dos genomas de Schistosoma mansoni e de Schistosoma japonicum permitiram a identificação por análise filogenética de dois principais clados de serpinas. S. mansoni mostra uma multiplicidade maior de genes de serpinas, talvez refletindo uma adaptação à infecção de um hospedeiro humano. Alvos putativos das serpinas de esquistossomos podem ser preditos a partir da sequência do "loop" do centro reativo. Serpinas de esquistossomos podem ter importantes papeis tanto na regulação pós-traducional de proteases derivadas do esquistossoma, quanto nos mecanismos de defesa contra a ação de proteases do hospedeiro.

Avaliação in vitro de fármacos pró-oxidantes sobre o Schistosoma mansoni / In vitro evaluation of drugs pro-oxidants on Schistosoma mansoni

Segundo a Organização Mundial de Saúde (2002), a esquistossomose é a segunda maior doença tropical, causadora de 200 a 300 mil mortes por ano. Mesmo apresentando alguns quimioterápicos eficazes para o tratamento, como o praziquantel (PZQ) e a oxamniquina (OXQ), ocorrem muitos casos refratários e efeitos colaterais. Diante deste contexto, é necessária a busca racional de novos medicamentos e combinações para o tratamento desta doença. Uma possível solução é o estudo de drogas relacionadas com o estresse oxidativo do patógeno. Dentre estas podem ser analisadas: a artemisinina (ART) , que induz uma maior produção de radicais livres por inibição da formação da hemozoína em Plasmodium falciparum; a butionina sulfoximina (850), que impede a produção da glutationa; além do dietilditiocarbamato de sódio (DDC), que age como inibidor das superóxido dismutases. Portanto, o objetivo deste trabalho foi testar in vitro essas drogas, isoladas e combinadas, analisando a atividade das superóxido dismutases, alterações morfológicas e produção de hemozoína em vermes adultos, além de avaliar a toxicidade em esplenócitos. A ART apresentou efeito esquistossomicida em concentrações elevadas. O DDC mostrou um efeito esquistossomicida satifatório e inibiu as superóxido dismutases. Quanto à associação ART - DDC, esta inibiu a formação da hemozoína, apresentou danos nos tegumentos dos vermes e não apresentou citotoxicidade significativa. Estes resultados indicam que estas drogas são viáveis para estudos in vivo, podendo ser uma nova alternativa quimioterápica para esta patologia.

Potential relation ibetween the appearance of biomphalaria alexandrina- biomphalaria glabrata hybrid in the irrigation system and the evolution of resistance to praziquntel lyeatment in Egypt

In the last decade, partial resistance to Praziquantel [PZQ] in treatment of schistosomiasis appeared in some villages in Egypt. This happened following the invasion of the irrigation system by hybrid snails of the indigenous, vector snail Biomphalaria alexandrina and the introduced Biomphalaria glabrata. The objective of this study was to investigate if the distribution of the hybrid snails in the irrigation system represents a factor, between others, which is related to the appearance of [PZQ] resistance. Therefore, three groups of mice were infected with Schistosoma mansoni cercariae obtained from infected B. alexandrina, B.glabrata and hybrid snails. Six weeks later, the animals were treated with.the usual curative dose of PZQ [500mg/kg body weight for two consecutive days] and sacrificed two weeks post-treatment. The results showed that worms reduction in the group infected with cercariae from hybrid snails was significantly less than that in the other two groups 86.1% versus 95.1% and 92.8%, respectively. The number of dead ova in the same group was also less, being 81.5% versus 97.5%, and 95.1% respectively. The numbers of ova/g liver was 56.6%, in the same group while 64.2 and 70.9 in the other two groups. The reduction in numbers of ova/g intestine was 81.9% in this group versus 86.1% and 88.4% in the other two groups.The present results give indication that the appearance of PZQ resistance against schistosomiasis in Egypt may return at least partially to the wide distribution of the hybrid Biomphalaria snails in this country

Distiftbution of freshwater snails with special reference to schistosomiasis intermediate host in El-Genaid sugar cane farm, central sudan

Several sugar cane factories for production of sugar in the Sudan. To each of these factories, a sugar cane farm was attached. Snail distribution, and specially distribution of the intermediate host snails of schistosomiasis, in the cane farms, in the Sudan, was never studied. The study was carried out from February 1995 to May 1996. The objectives is to study on the distribution of fresh water snails in a sugar cane farm in the Sudan, To determine the distribution of the different species seasonally in the canalization system of the sugar cane farm, with special reference to schistosomiasis intermediate host snails. Twenty scoops were taken at each sampling site during the monthly visits. Snails were identified to the species level intermediate host snails were screened for patent infection. The canalization system farm is a suitable habitat for fresh water snails. Seven species of snails are found in the canals. The prosobranchs snails, Cleopatra and Melanoides, dominate all other species. Snail species show marked variation between the canals and in the monthly distribution. The density of all snail species drops during the rainy season. Environmental factors; such as water flow, water level and density of vegetation; do no effect the distribution of the fresh water snails in the canalization system. The reproduction of B. pfeifferi snails in Algenaid farm has been affected by unknown factors which need further investigation to determine the reasons. There is the possibility of shifit from S. mansoni to S. haematobium

The distribution of interstitial cells of Cajal in the ileum is not altered by infection with Schistosoma mansoni.

BACKGROUND & OBJECTIVES: The interstitial cells of Cajal (ICC) act as pacemakers that generate slow waves and function as a relay between smooth muscle cells of the gastrointestinal (GI) tract. Recent reports indicate the crucial role played by the ICC in defining GI motility during human disease status like pyloric stenosis, Hirschsprung's disease and ulcerative colitis. Experimental data showed that Nippostrongylus infection in the rat caused an altered GI motility pattern accompanied by a complete loss of ICC-deep muscular plexus. The aim of the present study was to delineate if ICC were similarly affected during Schistosoma mansoni infections, thereby responsible for the disturbed GI motility patterns triggered in the afflicted mammalian host. METHODS & RESULTS: Immunohistochemistry was done using whole mounts and sections from naive and S. mansoni infected mice ileum. Primary antibodies detected Kit-immunoreactivity (Kit-ir representing ICC), PGP-9.5 (protein gene product 9.5 representing a neuronal marker), SK3 (ionic channel marker for non-Kit fibroblast like cells), and Cx43 (gap junction protein representing a muscle marker). Single/double immunofluorescence staining and confocal microscopy depicted that muscle thickness (Cx43-ir) and inflammatory infiltrate increased with infection. Kit-ir ICC and SK3-ir fibroblast like cells (FLC) were present at all normal locations as seen in controls and during acute and chronic stages of infection. INTERPRETATION & CONCLUSION: No disappearance of either ICC population was noted. A preferential (although not exclusive) location of inflammatory infiltrate in contact with SK3-ir FLC in the muscle layer was observed. The present study thus delineated that ICC are not affected during S. mansoni infections, and thereby may not be responsible for mediating the disturbed GI motility patterns caused by schistosomiasis.

Immunoparasitological study in bilharzial patients with or without hepatitis C virus in El-Beheira governorate

Hepatitis C virus infection and schistosomiasis are common in Egypt. Coinfection is not uncommon. Little and quite controversial data are known about biochemical profile in these patients. This study was designed to study IL-2 production as a marker of lymphocyte activity in patients suffering from schistosomiasis with or without hepatitis C virus infection. This work enrolled 513 patients [239 females and 274 males] of Damanhour Teaching Hospital. Study sample included 120 subjects to form 4 groups: gp I [30 normal subjects as control], gp II [30 patients +ve for S. mansoni only], gp III [30 patients seopositive for HCV only], and gp IV [30 patients with mixed S. mansoni and HCV infection]. The intensity of schistosomiasis was estimated by Kato-Katz technique. ELISA was used to detect anti HCV, HBs Ag and to estimate interleukin 2 [IL 2] in serum of selected groups. Indirect haemagglutination test was used to detect schistosomiasis among pure HCV. Complete blood picture and liver function tests were also done. Out of 513 samples examined, 89 [17.3%] were +ve for Schistosoma mansoni and 7 [1.4%] +ve for Schistosoma heamatobium. The overall prevalence rate among males was almost double that among females [21.9% versus 12.1%]. The risk of HCV infection increased 7 times with the presence of S. mansoni infection. Focusing on the risk factors for S. mansoni infection it was found that gender, water contact, low education, and low socioeconomic status were the most important factors affecting prevalence of S. mansoni infection which in turn increased the risk of HCV infection. In the selected studied groups the results of heamatological and biochemical parameters showed significant decrease in group IV [schistosomiasis + HCV] than that of normal controls, schistosomal, and HCV patients groups. On the other hand, there were an increase in serum bilirubin and aminotransferase enzymes in the group of mixed infections. It has been shown that, in patients with mixed infections, IL2 level was lower than that of the other 3 groups. In conclusion S. mansoni was the predominating species in the present study. History of water contact, low education, and low socioeconomic status were the most important determinant factors of schistosomiasis. The risk of HCV infection increased with the presence of schistosomiasis

Molecular approaches for the detection of Schistosoma mansoni: possible applications in the detection of snail infection, monitoring of transmission sites, and diagnosis of human infection

The detection of specific DNA sequences by polymerase chain reaction (PCR) has proved extremely valuable for the analysis of genetic disorders and the diagnosis of a variety of infectious disease pathogens. However, the application to the detection of Schistosoma mansoni is rare, despite a recommendation of the World Health Organization that a major focus of research on schistosomiasis should be on the development and evaluation of new strategies and tools for control of the disease. In this context, a few studies were published for the detection of the parasite in snails, monitoring of cercariae in water bodies, and diagnosis of human infection. The present minireview describes sensitive and specific PCR based systems to detect S. mansoni, indicating possible applications in the detection of snail infection, monitoring of transmission sites, and diagnosis of human infection.

Diagnóstico da infecção por trematódeos em moluscos através de Multiplex-PCR

A Fasciola hepatica têm despertado interesse médico e veterinário nos últimos anos, uma vez que, os casos de fasciolose humana e animal se tornam cada vez mais freqüentes em todo o mundo. Da mesma forma, o S. mansoni continua sendo estudado em decorrência de seu grande impacto sócio-econômico e na saúde pública. O diagnóstico clássico da infecção de S. mansoni em Biomphalaria bem como de F. hepatica em limneídeos é feito rotineiramente em laboratório através de exames dos moluscos após estímulo luminoso (exposição à luz artificial) para observação de cercárias, e/ou dissecando ou esmagando os moluscos, onde além de se observar cercárias também observa-se a presença de rédias (no caso de F. hepatica) e esporocistos, principalmente se estes estiverem localizados na glândula digestiva. Entretanto o encontro de larvas de helmintos em moluscos quase sempre traz resultados inconclusivos, uma vez que existe uma grande semelhança morfológica entre formas intramolusco de trematódeos. No presente trabalho, foi desenvolvido um diagnóstico molecular rápido e eficaz capaz de detectar F. hepatica e S. mansoni em seus hospedeiros intermediários

Com o intuito de detectar a infecção de S. mansoni e, simultaneamente identificar a espécie de Biomphalaria, utilizamos a Multiplex-PCR para amplificar a região ITS2 dos caramujos e a região do DNAmt desse trematódeo, utilizando simultanemente 6 iniciadores. Esse procedimento permitiu diagnosticar a infecção pelo S. mansoni e realizar a identificação espécie-específica do molusco parasitado, em uma única reação (artigo 1). Para a detectar a infecção de limneídeos por F. hepatica realizamos a Multiplex-PCR, utilizando 4 iniciadores em uma única reação, sob condições de alta estringência, permitindo a amplificação específica do DNA do trematódeo e do molusco (artigo 2). Este método foi altamente sensível, detectando a infecção por até um miracídio de F. hepatica no período pré-patente da infecção, não amplificando DNA de outros trematódeos. Além da especificidade, a Multiplex-PCR também permite o uso de um eficiente controle interno da reação pela amplificação do DNA do molusco. A via migratória e as alterações histopatológicas causadas por helmintos em moluscos têm sido estudadas através de técnicas histológicas

Diante das dificuldades encontradas em se identificar especificamente a presença de trematódeos em limneídeos através apenas da análise de cortes histológicos sob microscópio de campo claro, padronizamos um método sensível capaz de extrair DNA de cortes histológicos em lâminas que foram previamente fixados em formalina, embebidos em parafina e corados com HE (artigo 3). Essa metodologia permitiu detectar a presença de F. hepatica em L. viatrix através da Multiplex-PCR, que mostrou ser um método rápido, seguro e específico, altamente sensível capaz de amplificar DNA de tecidos fixados, a despeito da baixa quantidade de DNA e da degradação causada pelo processo de fixação, possibilitando detecção da presença da F. hepatica mesmo em lâminas onde não era possível observar estágios larvais desse trematódeo através da análise sob microscópio óptico. Dessa forma, as metodologias moleculares, propostas no presente trabalho, para identificação de trematódeos em seus hospedeiros intermediários contribuirão para um avanço em estudos epidemiológicos e de controle da fasciolose e da esquistossomose

Diagnóstico da infecção por trematódeos em moluscos através de Multiplex-PCR / Diagnosis of infection by trematodes in snails by Multiplex-PCR

A Fasciola hepatica têm despertado interesse médico e veterinário nos últimos anos, uma vez que, os casos de fasciolose humana e animal se tornam cada vez mais freqüentes em todo o mundo. Da mesma forma, o S. mansoni continua sendo estudado em decorrência de seu grande impacto sócio-econômico e na saúde pública. O diagnóstico clássico da infecção de S. mansoni em Biomphalaria bem como de F. hepatica em limneídeos é feito rotineiramente em laboratório através de exames dos moluscos após estímulo luminoso (exposição à luz artificial) para observação de cercárias, e/ou dissecando ou esmagando os moluscos, onde além de se observar cercárias também observa-se a presença de rédias (no caso de F. hepatica) e esporocistos, principalmente se estes estiverem localizados na glândula digestiva. Entretanto o encontro de larvas de helmintos em moluscos quase sempre traz resultados inconclusivos, uma vez que existe uma grande semelhança morfológica entre formas intramolusco de trematódeos. No presente trabalho, foi desenvolvido um diagnóstico molecular rápido e eficaz capaz de detectar F. hepatica e S. mansoni em seus hospedeiros intermediários.

Com o intuito de detectar a infecção de S. mansoni e, simultaneamente identificar a espécie de Biomphalaria, utilizamos a Multiplex-PCR para amplificar a região ITS2 dos caramujos e a região do DNAmt desse trematódeo, utilizando simultanemente 6 iniciadores. Esse procedimento permitiu diagnosticar a infecção pelo S. mansoni e realizar a identificação espécie-específica do molusco parasitado, em uma única reação (artigo 1). Para a detectar a infecção de limneídeos por F. hepatica realizamos a Multiplex-PCR, utilizando 4 iniciadores em uma única reação, sob condições de alta estringência, permitindo a amplificação específica do DNA do trematódeo e do molusco (artigo 2). Este método foi altamente sensível, detectando a infecção por até um miracídio de F. hepatica no período pré-patente da infecção, não amplificando DNA de outros trematódeos. Além da especificidade, a Multiplex-PCR também permite o uso de um eficiente controle interno da reação pela amplificação do DNA do molusco. A via migratória e as alterações histopatológicas causadas por helmintos em moluscos têm sido estudadas através de técnicas histológicas.

Diante das dificuldades encontradas em se identificar especificamente a presença de trematódeos em limneídeos através apenas da análise de cortes histológicos sob microscópio de campo claro, padronizamos um método sensível capaz de extrair DNA de cortes histológicos em lâminas que foram previamente fixados em formalina, embebidos em parafina e corados com HE (artigo 3). Essa metodologia permitiu detectar a presença de F. hepatica em L. viatrix através da Multiplex-PCR, que mostrou ser um método rápido, seguro e específico, altamente sensível capaz de amplificar DNA de tecidos fixados, a despeito da baixa quantidade de DNA e da degradação causada pelo processo de fixação, possibilitando detecção da presença da F. hepatica mesmo em lâminas onde não era possível observar estágios larvais desse trematódeo através da análise sob microscópio óptico. Dessa forma, as metodologias moleculares, propostas no presente trabalho, para identificação de trematódeos em seus hospedeiros intermediários contribuirão para um avanço em estudos epidemiológicos e de controle da fasciolose e da esquistossomose.

Applied study using leaves extract of Neirum ole and er L. to control the snail of Bulinus truncatus L. the intermediate host of Schistosomiasis in Iraq

The effects of Nerium ole and er leaves extracts were used in attempt to control the Bulinus truncatus snail which is the intermediate host of Schistosomiasis in Iraq. The powder of N.ole and er leaves was dissolved in water [50 mgl/1]. The study was carried out in a river that contains this snail in Al-Rasheed district about 25 Km south of Baghdad. Three stations were chosen for this study, the distance between each station is 500m. The first station was the control station; the water of second station was treated with the leaf extracts. The study showed high effects of N.ole and er extracts to control B. truncates. The effect in the third station were less than that f the second station because of dilution of the extract during its flow in the river. The effect of this extract was represented by mortality, the snails attempt to escape from the exposure media, disorders and troubles of behaviour in the submerge activity throughout the exposure [96hr]. The effect of the N.ole and er extracts was limited for the treated area only. This study showed the ability to use the N.ole and er extracts to control the snail B. truncatus.

Estudo sobre a patogenia da fibrose hepática periportal na esquistossomose do camundongo / Study on the pathogenesis of hepatic fibrosis in schistosomiasis periportal mouse

Neste estudo, avaliou-se a participação da resposta imunológica, o papel das re-infecções e a participação de alterações vasculares sobre o determinismo da forma grave no modelo participação de alterações vasculares sobre o determinismo da forma grave no modelo murino. Camundongos BAB/c, submetidos à infecções simples ou repetidas, foram sacrificados na fase crônica da doença. Para avaliação da resposta imune, foram medidas as citocinas IL-4, IL-5 e IFN-y a partir do sobrenadante de cultura de esplenócitos, determinou-se o índice de linfoproliferação e títulos de imunoglobulinas do soro contra antígenos específicos (IgG1, IgG2a, IgGeb, IgG3) e IgE total de camundongos submetidos à infecção simples, com quadros histopatológicos distintos. Foram determinados o percentual de vasos marcados pela laminina bem como a área ocupada pelo tecido fibroso no fígado de animais com quadros histopatológicos distintos, submetidos a infecções simples ou repetidas. Moldes de vinilite do sistema porta intra-hepático foram obtidos de camundongos Swiss Webster. A avaliação da carga parasitária e a dosagem de didroxiprolina foram realizadas em todos os animais BALB/c. O perfil de resposta imune predominante foi Th2 em animais com diferentes quadros hsitopatológicos. O exame morfométrico revelou um amior percentual de tecido fibroso e vasos em animais com fibrose periportal, submetidos à re-infecção. O número de ovos por grama de fígado foi semelhante para os dois grupos, apenas o número de vermes foi maior em animais submetidos à re-infecção. O estudo de moldes vasculares da veia porta demonstrou a presença de tortuosidades, amputações e frequentes distorções, semelhantes às características anatômicas encontradas na esquistossomose humana avançada...